jueves, 23 de febrero de 2023

Una valoración de Candela Cortés acerca de los resultados de nuestro proyecto

Hace escasas semanas, los alumnos de segundo de Bachillerato nos adentramos en el proyecto "Pepper vs Pseudomonas". Éste proyecto es un proyecto experimental que trata de conseguir un objetivo: determinar si las plantas, en concreto la Arabidopsis, podía crecer bajo distintas circunstancias, entre ellas; La presencia de capsaicina en diferentes dosis, la presencia de pseudomonas (bacterias), o incluso la presencia de extractos de pimientos, en concreto, de la variedad Alegría Riojana Verde, Alegría Riojana Roja, California Melchor Verde y California Melchor Rojo. Debemos dejar claro que la diferencia entre estas variedades de pimientos son: la forma y sobre todo la presencia de capsaicina.

Iniciamos la fase experimental el 24 de Enero. La clase se dividió en tres grupos para organizar el trabajo y que fuese más efectivo: El grupo de la investigadora Mª Ángeles (se dedicó a preparar los extractos de pimientos), el de Marichu ( prepararon los medios en los que iban a cultivarse las semillas, es decir, las placas) y el de Carmelo (sembraron 10 semillas por placa a lo largo de una línea horizontal). Hay que añadir que todos estos procesos se hicieron bajo un ambiente "estéril" creado por un mechero Bunsen. Éste conseguía crear una capa donde poder trabajar sin miedo a que las placas se contaminarían, pero más tarde hablaremos de los resultados.

Estas placas se sellaron y se dispusieron bajo la luz de cuatro bombillas con diferentes longitudes de onda, además de la propia luz que entra del exterior al laboratorio y se dejaron crecer para observar qué pasaba con ellas; ¿crecían?, ¿no crecían?, ¿cuáles sí y cuáles no? y sobre todo, ¿en qué se diferenciaban unas con otras?

Por otro lado, los investigadores volvieron a repetir todos los procesos de extracción de los pimientos, cultivo de placas y sembrado de semillas en el laboratorio del Centro Experimental, bajo unas condiciones mucho más idóneas, una semana después que las placas cultivadas por los alumnos en el laboratorio del IES Zaidín Vergeles.

Haciendo recapitulación; en total tenemos dos cultivos diferentes, creados en diferentes condiciones, pero con el mismo contenido.

A los pocos días, al volver al laboratorio la primera noticia que recibimos fue cuanto menos sorprendente: Más de la mitad de las placas estaban contaminadas. Al principio, para nosotros fue una gran sorpresa puesto que supuestamente habíamos trabajado bajo un ambiente estéril creado por el propio mechero Bunsen, pero claro, no contamos con que el mechero crea un ambiente estéril relativamente "bajo". Además de que bajo un misma mesa podíamos rondar una media de 7 personas, y por supuesto a más de uno por la propia emoción de estar cacharreando con materiales novedosos, pipetas automáticas, extractos de Pseudomonas o ver el diminuto radio de la semilla de Arabidopsis pues probablemente tocásemos algo que no debíamos. Y por supuesto, las propias bacterias presentes en el aire, que también pudieron influir en la propia contaminación.

Para sorpresa de todos, en la mayoría de casos, la presencia de hongos no impedía el crecimiento de la planta. Claro está que la presencia del mismo las altera, pero no las inhibe, por lo que aún podíamos sacar resultados concluyentes, y así lo hemos hecho.

Nos vino de maravilla la presencia del otro cultivo realizado por los investigadores en el laboratorio del Centro Experimental, puesto que así podíamos contrastar el crecimiento de una placa con el mismo contenido, pero estando una contaminada y otra no.

Hoy, 23 de Febrero, hemos tenido nuestra tercera sesión donde hemos estado debatiendo los datos y conclusiones que cada uno ha obtenido. Para empezar, una cosa que nos ha llamado la atención es que, aún habiéndose contaminado, las placas que estaban en el laboratorio han crecido mejor que las creadas en el Centro Experimental (teniendo en cuenta que el cultivo de unas y otras se desfasan 7 días). Las razones que se nos ocurren son: la temperatura a la que se encuentra el laboratorio del instituto (hace más calor) y la luz que se le ha proporcionado a las placas (mejor en el laboratorio escolar debido a la potencia además de la luz exterior, y la longitud de onda).

Una vez dicho esto, pasamos a los resultados apreciables en las placas:

- La presencia de una dosis baja de capsaicina favorece el crecimiento de la placa, sin embargo, una dosis alta le perjudica por completo. 

- La planta crece favorablemente bajo la presencia del pimiento Alegría Riojana Verde, pero no bajo la Alegría Riojana Roja.

- La presencia de Pseudomonas ayuda sin duda alguna al crecimiento de la planta

- La presencia de extracto de California Melchor Verde y California Melchor Rojo también favorece el crecimiento de la misma.

- La capsaicina, parece tener un efecto en las raíces de las plantas puesto que éstas parecen tener un mayor grosor comparadas con aquellas que se cultivaron en un medio únicamente con agua.

Tras estas conclusiones, llega la hora de preguntarse cómo seguir con el proyecto. La investigadora Mª Ángeles ha propuesto hoy una idea bastante interesante: " Si la presencia de Pseudomonas ayuda al crecimiento de la planta y la capsaicina en altas concentraciones le perjudica, ¿Por qué no cultivar en una misma placa tanto capsaicina como pseudomonas para ver si las bacterias ayudan a la planta a seguir creciendo derrotando a la capsaicina?"

A partir de su sugerencia, he estado meditando las palabras que nos ha dicho Pepe Palma; " la principal diferencia entre la Alegría Riojana Verde y la Roja es la presencia de capsaicina en la variedad roja".

Entonces, si en los resultados obtenidos hemos visto que la variedad verde crece favorablemente frente a la roja que no lo hace, y esto es primordialmente debido a la capsaicina, ¿Por qué basándonos en el experimento de Mª Ángeles no cultivamos en una misma placa extracto de Alegría Riojana Roja y Pseudomonas para ver si la acción de éstas bacterias ayuda al crecimiento de la planta aún habiendo Alegría Riojana Roja en el medio?

Los datos podrían ser concluyentes puesto que si la planta creciese favorablemente habríamos determinado que la lucha entre pimientos y Pseudomonas la ganarían las Pseudomonas y en caso contrario, los pimientos.

Candela Cortés Moya

Nueva visita de nuestro equipo de investigadores

De nuevo hoy hemos contado en la nueva sesión del proyecto con Marichu Campos, Mariángeles Muñoz, Carmelo Ruiz y Pepe Palma. Hemos contrastado el aspecto que tienen las placas que sembraron ellos en la Estación Experimental del Zaidín, y que crecemos en nuestro laboratorio, con las que ellos cultivan en un ambiente mucho más controlado que el nuestro. La imagen de abajo muestra cómo funciona su cámara de incubación y la información que proporciona al respecto.

Seguidamente van las imágenes. En la entrada anterior están las nuestras. Hemos incluido tanto aquellas a las que hacemos referencia arriba como las que se conservan observables de entre las que sembramos en nuestro laboratorio. Un aspecto esperable de estas ha sido la contaminación de un número de placas. Por el contrario, las inoculadas en la EEZ están progresando sin contaminaciones.

La primera fase del proyecto ya está casi superada. Nos queda esperar las dos semanas que habíamos propuesto cultivar las plantas y realizar las medidas. Luego tocará el análisis de resultados. Queda por tanto tiempo de plantear algún nuevo experimento, y en este sentido, uno de los aspectos más provechosos de la sesión ha sido la lluvia de ideas sobre lo que se podría hacer. De todo ello irá quedando constancia en este blog. Pero por ahora, toca observar las placas de abajo y compararlas con las de las entradas anteriores e ir sacando las conclusiones oportunas. Vamos con ellas en los comentarios.








 

Nuestras placas, hoy 23 de febrero de 2023

Las siguientes imágenes muestran el estado de nuestras placas. Las tres primeras fotos muestran las placas que fueron inoculadas en la Estación Experimental del Zaidín y que incubamos en nuestro laboratorio en condiciones ambientales.




Las imágenes siguientes muestran el estado de las placas que inicialmente sembramos en nuestro laboratorio. Muchas de ellas están contaminadas, pero aún se pueden leer resultados y extraer las conclusiones oportunas.





miércoles, 15 de febrero de 2023

El estado de las placas, 15 de febrero

Hoy 15 de febrero, las placas mostraban el aspecto que muestran las imágenes.



¿Observamos diferencias entre ellas?


martes, 14 de febrero de 2023

El estado de nuestras placas, 14 de febrero

Tras un primer análisis de las placas y constatar que algunas de ellas están contaminadas no todo está perdido. Así opinan nuestros investigadores. Por ello hemos decidido poner imágenes de las placas, tal y como están hoy, de manera que podamos extraer algunas conclusiones preliminares. Como veréis, algunas placas están repetidas; eso es para facilitar la comparación entre ellas.





Ahora es momento de analizar las placas y de extraer nuestras conclusiones preliminares. ¿Afecta la capsaicina? ¿En qué sentido? ¿Hay diferencias entre las variedades de pimientos? ¿Hay diferencias entre los pimientos verdes y rojos de la misma variedad? Con respecto a la variedad picante, ¿cómo relacionamos la respuesta de Arabidopsis ante la capsaicina frente a la variedad Alegría riojana? 

Dejad vuestras apreciaciones en los comentarios.

lunes, 13 de febrero de 2023

Resultados inesperados

Hoy lunes, hemos visto tras el fin de semana, el estado de nuestros cultivos de Arabidopsis en las distintas condiciones que estamos ensayando. Nos hemos encontrado con visitantes muy molestos en nuestras placas. Os dejo las imágenes para que hagamos una valoración de lo sucedido.





Esperamos vuestros comentarios.

jueves, 9 de febrero de 2023

La primera sesión experimental

Este jueves hemos tenido la primera sesión experimental de nuestro proyecto en nuestro laboratorio. Nos han acompañado Marichu Campos, María Ángeles Muñoz, José Manuel Palma y Carmelo Ruiz.  Recordamos que nuestro objetivo principal es valorar el efecto de determinados extractos y sustancias sobre la germinación y el crecimiento de las plantas, utilizando como planta patrón Arabidopsis thaliana. Nosotros llevaremos a cabo los experimentos en las condiciones de nuestro laboratorio y en paralelo se desarrollarán experimentos idénticos en la Estación Experimental del Zaidín con sus medios y con las condiciones mucho más controladas.  En esta sesión hemos procedido a preparar las placas con el medio en el que va a germinar de Arabidopsis con los distintos tratamientos y a la posterior siembra de las semillas en las mismas.

 

 En la figura de arriba se indican los tratamientos:

- Capsaicina 15 micromolar.
- Capsaicina 125 micromolar.
- Extracto de pimientos picante de la variedad Alegría riojana, verde y rojo.
- Extractos de pimientos dulces, tipo California variedad Melchor, verde y rojo.
- Extractos de Pseudomonas putida y Pseudomonas stutzeri.

Los resultados se compararán con los correspondientes controles, los extractos con agua Mili Q, y los microbiológicos con medio de cultivo King´s B.

El procedimiento de los tratamientos con los extractos se indica en la imagen siguiente.


Para llevar a cabo los experimentos nos dividimos en tres grupos. Uno de ellos procedió a sembrar las semillas de Arabidopsis en placas que ya venían preparadas y con los extractos añadidos de la Estación Experimental del Zaidín. Un segundo grupo se dedicó a preparar los extractos crudos a partir de pimientos frescos. El tercero filtró los extractos y suplementó las placas con 0,75 ml de los mismos. Finalmente nuevas semillas de Arabidopsis fueron sembradas en estas placas. 

Las placas son las semillas se van a dejar durante dos semanas a temperatura ambiente sometidas a ciclos de luz y oscuridad de 16 y horas respectivamente. Pasado ese tiempo se procederá a medir la longitud de las raíces de las plántulas.


 

Y para terminar, unas imágenes de la sesión del otro día. Es ahora momento de reflexionar sobre la primera sesión experimental y dejar nuestra valoración de lo realizado en los comentarios.


Los primeros resultados estadísticos

Una vez concluidas las medidas ya tenemos los primeros resultados estadísticos. Se trata de los valores medios de las longitudes de las raíc...